Questions et réponses courantes dans la préparation de la solution de thiocyanate de guanidine

Le thiocyanate de guanidine est un puissant dénaturant des protéines. Il peut non seulement dissoudre rapidement les protéines, conduire à la fragmentation de la structure cellulaire et séparer rapidement les protéines nucléaires des acides nucléiques en raison de la destruction de la structure secondaire, mais il a également un fort effet de dénaturation sur les RNases. Par conséquent, le thiocyanate de guanidine peut être utilisé comme dénaturant pour lyser les cellules, séparer l'ARN des protéines et libérer l'ARN en solution. Cependant, certains problèmes sont souvent rencontrés dans la préparation et l'utilisation d'une solution de thiocyanate de guanidine. Cet article répondra à ces problèmes un par un.

La solution de thiocyanate de guanidine doit-elle être utilisée et préparée maintenant ?

La concentration finale de thiocyanate de guanidine était de 4 m à titre d'exemple : 42 mm de citrate de sodium, 0,83 % n-Lauryl sarcosine (sodium dodécyl, n-méthylglycine), 0,2 mm Î- Préparation de tampon CSB à partir de mercaptoéthanol ; 25 g de thiocyanate de guanidine et 33 ml de solution tampon CSB sont mélangés jusqu'à dissolution complète. La solution dénaturée peut être préparée par chauffage et dissolution à 65℃ et stocké à 4℃ pour la veille.

Par conséquent, la solution de thiocyanate de guanidine n'a pas besoin d'être utilisée et préparée maintenant, et il existe actuellement des solutions de différentes concentrations sur le marché, mais le temps de stockage n'est pas facile à être trop long, sinon il y aura une précipitation, qui doit être soigneusement vérifié avant utilisation; De plus, s'il y a trop de préparation ponctuelle, il est recommandé de remballer.

La solution de thiocyanate de guanidine doit-elle être stérilisée après préparation ?

Il n'est pas nécessaire de stériliser la solution de thiocyanate de guanidine, qui n'est pas très stable, et l'eau DEPC à 0,1% est généralement utilisée avec la solution de pyrolyse, et l'eau a été stérilisée. De plus, tous les réactifs pour extraire l'ARN doivent être préparés avec de l'eau DEPC, et le réactif doit être nouvellement ouvert et utilisé exclusivement pour l'ARN.

Bien que le lysat préparé n'ait pas besoin d'être stérilisé, il convient de noter que les produits en plastique utilisés dans l'expérience ont été marqués sans RNase. S'ils n'ont pas été ouverts pour utilisation, ils peuvent être utilisés directement. D'autres doivent être traités : ajouter du DEPC dans de l'eau bidistillée pour obtenir sa concentration finale à 0,1%, y tremper les produits plastiques, aérer la cuisine pendant la nuit, puis les sceller avec du papier aluminium, Stérilisation haute température et haute pression pendant au moins 30min, sec et en veille.